摘要： 为探究禽偏肺病毒C型（aMPV/C）感染A549细胞后，Ras脑内类似物7（Rab7）对病 毒复制的影响，试验将融合表达绿色荧光蛋白（GFP）的Rab7重组质粒（pGFP-Rab7）和融合表 达 GFP 的显性负向突变 Rab7 重组质粒（pGFP-Rab7-DN）分别转染 A549 细胞并接种 aMPV/C 后，进行激光共聚焦成像，并用Image J软件对荧光图像进行荧光强度分析；随后将pCMV-FlagRab7和pCMV-Flag转染A549细胞并接种aMPV/C，分别采用实时定量PCR（qPCR）、蛋白免疫 印记（Western blot）、组织半数感染量（TCID50）检测aMPV/C N基因转录水平、aMPV/C N蛋白表 达水平以及病毒效价；将融合表达 mcherry的 Rab7重组质粒（pCMV-mcherry-Rab7）与表达融 合 GFP 的 aMPV/C 各结构蛋白分别转染 A549细胞，采用激光共聚焦显微镜观察定位情况；最 后，将 pCMV-Flag-Rab7 分别与表达融合 GFP 的 aMPV/C 结构蛋白共转染 HEK293T 细胞进行 免疫共沉淀试验，分析两者的互作情况。结果显示：与Rab7-DN相比，Rab7与aMPV/C核蛋白 （N）在细胞质中存在多个明显的共定位荧光点；与转染 pCMV-Flag 组相比，pCMV-Flag-Rab7 转染组中 aMPV/C N基因的转录水平、N蛋白的表达水平以及病毒效价均显著升高（P<0.05）。 相反，与转染无意 siRNA（siNC）相比，转染 Rab7 特异性 siRNA（siRab7）后 aMPV/C N 基因的转 录水平、N蛋白的表达水平以及病毒效价均显著降低（P<0.05）；Rab7蛋白与多个aMPV/C结构 蛋白（N、F、M、G、SH、P、M2-1、M2-2、L1、L2、L3）在细胞质中存在共定位，而Rab7与L4蛋白无 此现象；免疫沉淀的样品中只在G和L2蛋白的位置出现了特异性条带。综上所述，Rab7通过 与多个蛋白（G和L2）互作从而影响aMPV/C的复制。 。

关键词: Rab7；禽偏肺病毒C型；复制；表达；互作

中图分类号: 

• S855.3