摘要： 试验拟筛选与 C2EIP 互作的蛋白，构建调节 PGCs 形成过程的泛素化 E3 连接酶 复合体。通过逆转录和同源重组等方法构建鸡 PGCs 酵母文库；将 C2EIP 连入诱饵空载体 pGBKT7中，并转化酵母感受态细胞进行诱饵载体（C2EIP-pGBKT7）的毒性和自激活检测；将 酵母文库与诱饵载体菌液共培养后，通过涂板筛选阳性克隆并进行测序和生物信息学分析筛 选互作蛋白。结果显示：成功构建了鸡 PGCs 酵母文库，其滴度为 3.0×106 cfu/mL，总库容为 1.5×107 cfu，且重组率为100%，符合筛库要求。成功构建无毒性和不能自激活的C2EIP-pGBKT7 诱饵载体，能够用于后续的文库筛选。C2EIP-pGBKT7诱饵载体菌液与酵母文库共培养后，通 过PCR测序与蛋白序列分析后共筛选了36个C2EIP的互作蛋白，其中RCJMBM04和CCDC174 蛋白功能域分析发现分别具有典型的RING功能域和PPXY基序，进行的生物信息学分析发现 WWP1和 WWP2具有典型的 WW 功能域，能够与 CCDC174结合。研究表明，试验成功鉴定了 C2EIP/RCJMB04/CCDC174/WWP 泛素化 E3 连接酶复合体，为后续研究泛素化修饰调控鸡 PGCs形成机制奠定理论基础。

关键词: 鸡；原始生殖细胞；泛素化修饰；C2EIP；酵母双杂交文库

中图分类号: 

• S831.2