摘要: 为快速准确检测鸡圆环病毒(CCV),试验根据 CCV Rep基因设计特异性引物,以CCV 阳性病料提取的 DNA 为模板进行 PCR 扩增,构建 CCV 重组质粒,建立检测CCV的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量 PCR 方法。结果显示:试验建立的方法对 2.87×108~2.87×101copies/μL浓度范围的 CCV 重组质粒标准品呈现良好的线性关系,相关系数(R2)为 0.993 6,灵敏度比常规PCR高100倍;该方法对鸡传染性贫血病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒等常见鸡病毒性病原以及多杀性巴氏杆菌、禽致病性大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌无特异性扩增,批内和批间变异系数均不超过1%;该方法对60份疑似CCV感染临床样品检测结果显示,CCV阳性检出率(16.67%)高于常规 PCR。上述结果表明,研究建立的 CCV SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,检出限为2.87×101 copies/μL,可以用于CCV的快速定量检测。
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