鸭呼肠孤病毒p18重组蛋白表达、纯化及其单克隆抗体制备

doi:10.16372/j.issn.1004-6364.2023.12.009

中国家禽 ›› 2023, Vol. 45 ›› Issue (12): 53-58.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2023.12.009

鸭呼肠孤病毒p18重组蛋白表达、纯化及其单克隆抗体制备

黄聪，刘志艺，刘忠媛，黄远玲，李嘉，刘静宜，刘英楠，陈鸿军，陈宗艳^*

（中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241）

出版日期:2023-12-15 发布日期:2023-12-12
作者简介:黄聪（1996-），女，硕士研究生，研究方向为兽医学，E-mail：connie_huang@126.com

Online:2023-12-15 Published:2023-12-12

摘要/Abstract

摘要： 研究旨在制备DRV p18蛋白单克隆抗体。试验通过原核表达并纯化DRV p18重组蛋白，经BCA蛋白浓度测定后免疫BALB/c小鼠；通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞，获得的p18单克隆抗体通过ELISA、IFA和Western blot试验进行鉴定，并将杂交瘤细胞腹腔注射小鼠获得单抗腹水，通过Western blot试验验证其特异性。结果显示：纯化的重组p18蛋白浓度为1.37 mg/mL，经过三轮亚克隆获得4株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E3、2C4、4A2和4D4，亚型鉴定1E3和4D4重链为IgG1型、2C4重链为IgM型、4A2为IgG2b型，轻链均为κ型；4株单克隆抗体均能使感染DRV的BHK-21细胞发出特异性荧光，并在18 ku处存在特异性条带；4D4腹水ELISA效价为1∶409 600，Western blot效价达1∶102 400，IFA效价为1∶51 200；4D4与DRV反应，而不与其他禽源常见病毒反应。研究成功制备了抗DRV p18蛋白的单克隆抗体，为进一步研探究p18蛋白的功能奠定基础。

中图分类号:

S855.3

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