中国家禽 ›› 2023, Vol. 45 ›› Issue (2): 39-45.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2023.02.007

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微滴式数字PCR定量检测滑液囊支原体方法的建立及应用

谢志勤,谢芝勋*,张艳芳,范 晴,谢丽基,万丽军,罗思思,李 孟,张民秀,曾婷婷,黄娇玲,王 盛,李 丹,韦 悠,李小凤,任红玉,阮志华   

  1. (广西壮族自治区兽医研究所,广西兽医生物技术重点实验室,农业农村部中国-东盟(广西)跨境动物疫病防控重点实验室,广西南 530001)
  • 发布日期:2023-02-21
  • 作者简介:谢志勤(1965-),男,本科,研究员,主要从事畜禽疫病研究,E-mail:647968631@qq.com

  • Published:2023-02-21

摘要: 为绝对定量滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS),试验根据已发表的MS VlhA基因序列,针对其保守区域分别设计了1对特异引物和1条探针,建立了ddPCR定量检测MS的方法,并检测该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示:建立的方法最佳引物浓度为20 μmol/μL,最佳探针浓度为10 μmol/μL,最佳退火温度为54 ℃;该方法仅检测出MS毒株,不能检测出其他禽源病原,MS重组质粒标准品最低检测限为3.5拷贝/μL,3个连续稀释的MS重组质粒DNA检测的变异系数均小于5%;45份病鸡喉拭子、肺脏及关节囊样品检测结果显示,该方法的MS阳性检出率(11.1%)高于荧光定量PCR(8.9%)。结果表明,建立的ddPCR方法定量检测MS特异性强、敏感性高、重复性好,为绝对定量MS提供了适合的技术手段。

关键词: 微滴式数字PCR;定量检测;鸡滑液囊支原体

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