miR-302d的载体构建及其与Tle4基因的靶向关系验证

doi:10.16372/j.issn.1004-6364.2023.02.004

中国家禽 ›› 2023, Vol. 45 ›› Issue (2): 20-26.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2023.02.004

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miR-302d的载体构建及其与Tle4基因的靶向关系验证

吴宇慧¹，席一凡¹，张文慧¹，程富富¹，胡菜¹，赵宗仪¹，陈欣雨¹，李熠²，张亚妮^1*

（1.扬州大学动物科学与技术学院，江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室，江苏扬州 225009；2.温州肯恩大学计算机科学与技术学院，浙江温州 325035）

发布日期:2023-02-21
作者简介:吴宇慧（1998-），女，硕士研究生，研究方向为动物胚胎工程与遗传工程，E-mail：1615743280@qq.com

Published:2023-02-21

摘要/Abstract

摘要： 试验旨在探究精原干细胞（SSCs）形成过程中的关键miR-302d行使功能的分子机制。试验克隆miR-302d前体序列并连入PGMLV-CMV-MCS-EF1-ZsGreen1-T2A-Puro构建miR-302d过表达载体（miR-302d mimics）；合成miR-302d的干扰靶点并连入PGMLV-SC5载体构建miR-302d干扰载体（miR-302d inhibitor）。通过生物信息预测获得miR-302d靶基因并构建其3′UTR的野生型（WT）和突变型载体（MT）；将miR-302d过表达载体分别与WT和MT载体共转染DF-1和293T细胞，检测靶基因3′UTR的活性。同时检测在DF-1细胞中过表达或干扰miR-302d后靶基因的表达变化。结果显示：成功构建miR-302d的过表达和干扰载体；预测结果显示Tle4为miR-302d的潜在靶基因，且该基因为ESCs分化为SSCs过程的重要基因；双荧光素酶活性检测结果显示不论是在DF-1还是293T细胞中，与转染WT+miR-NC组相比，转染WT+miR-302d组的双荧光素酶活性显著下降（P<0.05），而共转染MT+miR-302d组的荧光素酶活性差异不显著（P>0.05），且过表达miR-302d后下调Tle4的表达，而干扰miR-302d后上调Tle4的表达。结果表明，miR-302d可直接调节靶基因Tle4的表达。

中图分类号:

S831.2

吴宇慧，席一凡，张文慧，程富富，胡菜，赵宗仪，陈欣雨，李熠，张亚妮. miR-302d的载体构建及其与Tle4基因的靶向关系验证[J]. 中国家禽, 2023, 45(2): 20-26.

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