中国家禽 ›› 2020, Vol. 42 ›› Issue (3): 29-34.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2020.03.006
姚晓慧1,2,3,4,李拓凡1,2,3,4,谢 泉1,2,3,4,万志敏1,2,3,4,邵红霞1,2,3,4,秦爱建1,2,3,4,叶建强1,2,3,4*
摘要: 为深入探究鸡源EphA2生物学功能,试验首先对鸡源EphA2基因进行了原核分段 克隆以及真核表达载体构建。重组原核表达载体分别命名为pGEX-6p-1-EphA2-A(1-534aa)和 pGEX-6p-1-EphA2-B(585-972aa),真核表达载体命名为pcDNA3.1-EphA2。重组原核表达载体 转化BL21后经IPTG诱导以及SDS-PAGE分析发现,融合蛋白GST-EphA2-A和GST-EphA2-B 均获得有效表达。以纯化的GST-EphA2-A和GST-EphA2-B蛋白免疫小鼠制备了抗鸡EphA2 多克隆抗体。间接免疫荧光试验以及Western blot试验表明,所制备的抗鸡EphA2多克隆抗 体不仅能识别转染pcDNA3.1-EphA2的DF-1及LMH细胞中表达的外源性EphA2,而且还能 有效识别内源性鸡源EphA2蛋白。本研究中鸡EphA2的成功表达及其多克隆抗体研制为后 续研究鸡EphA2的功能提供了分子生物学工具。
中图分类号: