摘要: 为制备鼠伤寒沙门菌SseB和SseL蛋白的特异性多克隆抗体(多抗),以鼠伤寒沙门 菌S025为供体菌,PCR扩增sseB和sseL基因,插入原核表达载体pGEX-6P-1,转化BL21(DE3) 感受态细胞进行诱导表达,获得纯化蛋白免疫小鼠制备多抗;使用λ-red同源重组方法构建 sseB和sseL基因缺失株;通过野生株和缺失株的Western-blot分析验证制备血清的特异性。结 果显示:成功构建出重组质粒pGEX-6P-1-sseB和pGEX-6P-1-sseL,转化感受态细胞后,在 IPTG 1 mmol/L、温度28 ℃、转速为220 r/min、诱导时间12 h的条件下,SseB和SseL蛋白呈可溶 性表达;纯化蛋白免疫小鼠制备了多抗,Western-blot分析显示该多抗可特异性检测鼠伤寒沙 门菌中的SseB和SseL蛋白。这两种蛋白多抗的获得为进一步研究其功能奠定基础。
中图分类号: