中国家禽 ›› 2021, Vol. 43 ›› Issue (3): 22-27.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2021.03.005

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鸽圆环病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的建立及应用

亓玉卓1,2,3,梁琳1,2,朱亚丽1,2,梁瑞英1,2,贾亚雄1,单虎3*,崔尚金1,2*   

  1. (1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193; 2.农业农村部兽用药物与诊断技术北京科学观测实验站,北京100193; 3.青岛农业大学动物医学院,山东青岛266109)
  • 发布日期:2021-03-24
  • 作者简介:亓玉卓(1996-),女,硕士研究生,研究方向为鸽传染病,E-mail:qyz0314@163.com

  • Published:2021-03-24

摘要: 为建立一种针对鸽圆环病毒(PiCV)的快速诊断方法,试验根据PiCV的Rep保守 基因序列,设计合成一对特异性引物,建立了PiCV荧光定量PCR检测方法,对其敏感性、特异 性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果表明:在最佳反应条件下,所建立 的PiCV荧光定量PCR方法在1.43×102~1.43×108 copies/μL标准品范围内具有良好的线性相 关性,线性相关系数为0.998;敏感性试验结果显示,该方法最低可检测到1.43×102 copies/μL标 准品,是常规PCR检测方法的1 000倍;特异性试验结果显示,该方法与其他常见的鸽病病原 不发生交叉反应;重复性评价结果显示,批内与批间的变异系数均小于0.8%;所建立PiCV荧 光定量PCR方法对临床鸽血清样品检测结果显示,PiCV阳性率达38.7%,高于常规PCR方法 的检测阳性率(28.7%),说明该方法具有良好的适用性。研究结果PiCV的流行病学调查、病原 学监测及定量研究奠定了基础。

关键词: 鸽圆环病毒;实时定量PCR;Rep 基因;检测

中图分类号: