中国家禽 ›› 2021, Vol. 43 ›› Issue (3): 16-21.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2021.03.004
何倩1,2,沈逵1,2,秦爱建1,2,3,钱琨1,2,3,4*
摘要: 为构建禽白血病病毒(ALV)衣壳蛋白P27慢病毒表达载体,并检测其在鸡肝癌细 胞LMH 中的表达,试验以实验室前期构建的pcDNA3.1-p27 为模板,扩增p27 基因,克隆入 pLVX-IRES-ZsGreen1载体,构建的重组质粒命名为pLVX-p27,与辅助质粒psPAX2和pMD2.G 共转染至HEK293T细胞,包装获得表达p27 基因的重组慢病毒。将慢病毒上清感染293T和 LMH细胞,检测细胞中p27 基因的转录水平和蛋白表达水平。结果显示:重组质粒pLVX-p27 构建正确,收集的慢病毒上清滴度为9×104 TU/mL;实时荧光定量PCR、Western blot和共聚焦 荧光试验结果显示P27蛋白主要定位于胞浆,p27 基因的RNA和蛋白表达量在感染后96 h内 随着感染时间延长逐渐升高。研究表明:表达p27 基因的慢病毒包装成功,并且能感染293T 及禽源LMH细胞,为进一步研究P27的生物学功能提供了工具。
中图分类号: