ALV-A p27基因的原核表达及其鼠源多克隆抗体的制备

doi:10.16372/j.issn.1004-6364.2019.02.004

中国家禽 ›› 2019, Vol. 41 ›› Issue (2): 15-19.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2019.02.004

ALV-A p27基因的原核表达及其鼠源多克隆抗体的制备

徐丽^1,2*，林汉卿^1,2，3*，温贵兰^1,2**，李昌红^1,2，张升波^1,2*，田浪^1,2*，杨佰启^1,2*，陈彦希^1,2*，文明^1,2*，龚新勇^1，2*

（1.贵州大学动物科学学院，贵州贵阳550025； 2.贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点试验室，贵州贵阳550025； 3.思南县动物疫病预防控制中心，贵州铜仁565100）

出版日期:2019-02-15 发布日期:2021-01-27
作者简介:徐丽（1994-），女，硕士研究生，研究方向为兽医微生物与免疫学，E-mail：xuxu2953@qq.com；林汉卿（1994-），女，硕士研究生，研究方向为兽医微生物与免疫学，E-mail：285409802@qq.com

Online:2019-02-15 Published:2021-01-27

摘要/Abstract

摘要： 试验拟通过构建A亚群禽白血病病毒（ALV-A） p27 基因原核表达载体，从而制备抗p27蛋白鼠源多克隆抗体。将感染ALV-A毒株的DF-1细胞反复冻融后提取RNA并反转录为cDNA，利用PCR扩增获得ALV-A p27 基因，将目的基因克隆至pColdⅠ载体，并转化入大肠杆菌BL21（DE3）菌中进行诱导表达，经镍柱纯化后免疫28~32日龄的雌性小鼠，采用间接 ELISA法测定抗体效价，Western blot检测抗体特异性。试验经PCR扩增出750 bp左右的特异性条带，并成功构建pColdⅠ-ALV-A-p27原核表达载体，加入终浓度为1 mmol/L的IPTG于 18 ℃诱导表达18~24 h成功得到重组蛋白，该蛋白主要以包涵体形式存在。间接ELISA检测显示，制备的鼠源多克隆抗体血清抗体效价为1∶3 200；Western blot检测结果表明，制备的多克隆抗体能特异性识别原核表达的p27蛋白。试验结果在ALV的抗原分析、血清学诊断等方面有着重要的应用价值。

中图分类号:

S858.31

徐丽，林汉卿，温贵兰，李昌红，张升波，田浪，杨佰启，陈彦希，文明，龚新勇. ALV-A p27基因的原核表达及其鼠源多克隆抗体的制备[J]. 中国家禽, 2019, 41(2): 15-19.

ALV-A p27基因的原核表达及其鼠源多克隆抗体的制备

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