鸡膜联蛋白A2的原核表达与纯化

doi:10.16372/j.issn.1004-6364.2020.08.002

中国家禽 ›› 2020, Vol. 42 ›› Issue (8): 7-11.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2020.08.002

鸡膜联蛋白A2的原核表达与纯化

高洪波^1，2，袁超^1，2，周磊^1，2，韩一帆^1，2，陈佳琪²，段志强^1，2*

（1.贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，贵州贵阳550025；2.贵州大学动物科学学院，贵州贵阳550025）

发布日期:2020-11-09
作者简介:高洪波（1993-），男，硕士研究生，研究方向为家禽遗传育种，E-mail：1358290965@qq.com

Published:2020-11-09

摘要/Abstract

摘要： 试验旨在对鸡膜联蛋白A2（ANXA2）基因进行原核表达与纯化。利用鸡ANXA2 基因特异性引物从鸡卵泡细胞cDNA中扩增ANXA2 基因，亚克隆至原核表达载体pET-32a（+）构建重组原核表达载体pET-32a-chANXA2。将其转化到大肠杆菌BL21（DE3）进行诱导表达，并分析重组蛋白的表达形式；利用含Ni2+琼脂球对重组蛋白进行纯化，并利用Western blot进行鉴定。结果显示：成功构建重组原核表达载体pET-32a-chANXA2，重组蛋白His-chANXA2在0.1 mmol/L IPTG、诱导表达5 h和30 ℃诱导温度条件下表达量高，其在上清和包涵体中均有表达，但主要以包涵体形式存在。利用含Ni2+琼脂球从诱导菌裂解物上清中得到了纯度较高的重组蛋白，Western blot检测到与预期大小相符的重组蛋白条带。研究结果为后续开展ANXA2调控鸡卵泡发育的分子机制研究奠定基础。

中图分类号:

S831.2

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