中国家禽 ›› 2024, Vol. 46 ›› Issue (5): 62-69.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2024.05.009
扈立伟1,任 君1,卢宝平1,刘 青1,朱凡杰1,顾天越1,包利霞1,刘婷婷1,王鑫源1,朱晓琛1,张东超1,2*,金天明2,3*
摘要: 试验旨在设计和构建基于鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白和鹦鹉热衣原体 (Cps)主要外膜蛋白(MOMP)的抗原多表位DNA疫苗,并分析其免疫原性。研究利用免疫信息 学方法筛选出IBV S1蛋白和Cps MOMP蛋白的优势抗原表位,设计多表位基因M,并利用多种 生物信息学软件对其进行预测分析;将M基因、S1和MOMP串联基因分别连接至真核表达载体 pEGFP-N1并转染至 DF-1 细胞,利用 Western blot 检测目标蛋白的表达情况。将上述重组质 粒肌内注射 7日龄雏鸡,四免后检测免疫鸡血清中特异性抗体 IgG、细胞因子及 T淋巴细胞含 量。结果显示:构建的表位蛋白结构稳定、免疫原性较好且无副作用;重组质粒 pEGFP-M 和 pEGFP-S1-MOMP与预期大小相符;与pEGFP-N1组和PBS组相比,四免后,pEGFP-M免疫组 鸡血清中抗 IBV IgG 和抗 Cps IgG 抗体水平极显著升高(P<0.01),与 pEGFP-S1-MOMP 组相 当;pEGFP-M组鸡血清中细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平,T淋巴细胞 抗原 CD3+ 、CD4+ 和 CD8+ 含量均极显著高于 pEGFP-N1 组和 PBS 组(P<0.01)。结果表明,构建 的多表位 DNA疫苗 pEGFP-M能够激发鸡的体液免疫和细胞免疫反应,为研制同时预防鸡传 染性支气管炎和禽衣原体病的多表位疫苗奠定基础。
中图分类号: