中国家禽 ›› 2023, Vol. 45 ›› Issue (12): 1-8.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2023.12.001

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先导编辑在鸡胚成纤维细胞系中的效率研究

高 翔,韩瑞莹,张 喆,伍钊涛,唐非台,王晓丽,唐小川*   

  1. (广西大学动物科学技术学院,广西南宁 530004)
  • 出版日期:2023-12-15 发布日期:2023-12-12
  • 作者简介:高翔(1998-),男,硕士研究生,研究方向为基础兽医组织胚胎发育,E-mail:g18228064989@163.com

  • Online:2023-12-15 Published:2023-12-12

摘要: 为探究先导编辑在鸡细胞系中的基因编辑效率,研究通过点突变和重组连接的方式构建先导编辑的表达质粒,使用在线软件设计并化学合成靶向OVM、MSTN和NHE1基因的先导编辑引导RNA(pegRNA)质粒,脂质体转染上述质粒至鸡胚成纤维细胞系(DF-1)中并进行药物筛选,PCR产物TA克隆测序检测并统计各位点的编辑效率。结果显示:测序和PCR鉴定结果表明先导编辑表达质粒构建成功;DF-1中OVM基因经先导编辑后成功产生错义突变,其中精确编辑效率为41.10%、错误插入与缺失(indel)效率为6.67%,均显著优于对照组的常规基因编辑(P<0.05);MSTN基因的先导编辑精确编辑效率为10.24%、indel效率为13.57%,NHE1基因的先导编辑精确编辑效率为24.88%、indel效率为7.18%。结果验证了先导编辑在鸡细胞系中的有效性和普适性,为其进一步应用于基因编辑鸡的制备奠定基础。

关键词: 先导编辑;鸡胚成纤维细胞系;CRISPR基因编辑;同源重组修复

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