中国家禽 ›› 2023, Vol. 45 ›› Issue (10): 6-11.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2023.10.002
何书海1,2,张 晒1,2,焦凤超1,2,位格格1,王 旭1,黄守孝1,董建国1,2*
摘要: 为获取鸡骨髓源造血干细胞(HSC)和建立其体外培养方法,试验从鸡长骨中获取骨髓单个核细胞,流式细胞术分选出CD34+ HSC后,在体外进行培养和诱导分化,进一步观察CD34+ HSC的形态、生长状态、集落形成能力和分化能力。结果显示:IMDM培养基中添加50 ng/mL 干细胞生长因子、30 ng/mL Flt-3 配体、10 μg/mL 白细胞介素-3、50 ng/mL 白细胞介素-6以及20%鸡血清可维持鸡CD34+ HSC的短期体外培养,最长可存活10 d。将上述培养体系加入到甲基纤维素半固体培养基中,可使鸡CD34+ HSC形成典型的干细胞克隆集落;在上述培养体系中加入50 ng/mL血小板生成素和80 ng/mL的粒细胞集落刺激因子,可诱导鸡CD34+HSC向粒系细胞分化。瑞氏-姬姆萨染色结果显示,鸡CD34+ HSC的胞核较大,呈蓝紫色,核染色质细而分散,胞浆呈浅蓝色,均匀无颗粒。研究提示:在培养体系中添加鸡造血细胞生长因子,可实现鸡骨髓源CD34+HSC的体外扩增和定向诱导分化。
中图分类号: