中国家禽 ›› 2019, Vol. 41 ›› Issue (2): 15-19.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2019.02.004
徐丽1,2*,林汉卿1,2,3*,温贵兰1,2**,李昌红1,2,张升波1,2*,田浪1,2*, 杨佰启1,2*,陈彦希1,2*,文明1,2*,龚新勇1,2*
摘要: 试验拟通过构建A亚群禽白血病病毒(ALV-A) p27 基因原核表达载体,从而制 备抗p27蛋白鼠源多克隆抗体。将感染ALV-A毒株的DF-1细胞反复冻融后提取RNA并反转 录为cDNA,利用PCR扩增获得ALV-A p27 基因,将目的基因克隆至pColdⅠ载体,并转化入大 肠杆菌BL21(DE3)菌中进行诱导表达,经镍柱纯化后免疫28~32日龄的雌性小鼠,采用间接 ELISA法测定抗体效价,Western blot检测抗体特异性。试验经PCR扩增出750 bp左右的特异 性条带,并成功构建pColdⅠ-ALV-A-p27原核表达载体,加入终浓度为1 mmol/L的IPTG于 18 ℃诱导表达18~24 h成功得到重组蛋白,该蛋白主要以包涵体形式存在。间接ELISA检测 显示,制备的鼠源多克隆抗体血清抗体效价为1∶3 200;Western blot检测结果表明,制备的 多克隆抗体能特异性识别原核表达的p27蛋白。试验结果在ALV的抗原分析、血清学诊断 等方面有着重要的应用价值。
中图分类号: