摘要： 为建立用于鹅星状病毒1（GAstV 1）和鹅星状病毒2（GAstV 2）感染快速检测的实 时荧光定量 RT-PCR 方法，试验根据部分 GAstV ORF2基因和部分 3' 非编码区序列设计合成 特异性引物和探针，采用矩阵法获得引物和探针的最优浓度，在优化退火温度的基础上，分别 建立扩增GAstV 1和GAstV 2的标准曲线，进一步验证该方法的特异性、敏感性和重复性，建立 的方法用于临床样品的检测，并与文献报道的常规RT-PCR方法进行比较。结果显示：优化后的 反应体系中最优上、下游引物浓度均为0.40（或0.50）μmol/L，探针浓度均为0.50 μmol/L，扩增 线性范围分别为 3.26×103 ~3.26×108 拷贝/μL 和 7.09×103 ~7.09×108 拷贝/μL，相关系数均为 0.998；该方法可特异性检出两种 GAstV，但对新城疫病毒、H9 亚型禽流感病毒、鸭坦布苏病 毒、新型鸭呼肠孤病毒、鹅细小病毒和血清4 型禽腺病毒6种鹅病相关病毒的核酸均无扩增信号； 其检测限分别为3.26×102 拷贝/μL和 7.09×101 拷贝/μL；组内变异系数和组间变异系数均低于3%。 建立的实时荧光定量RT-PCR方法对临床样品的检测结果显示，GAstV阳性率为90.57%（96/106）； 而文献报道的常规RT-PCR方法对GAstV 1和GAstV 2的混合阳性率为62.26%。研究表明，建 立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法为同时检测GAstV 1和GAstV 2提供了快速、敏感、特 异且能满足临床样本需求的检测方法。

关键词: 鹅星状病毒；荧光定量RT-PCR；TaqMan探针

中图分类号: 

• S852.5