中国家禽 ›› 2024, Vol. 46 ›› Issue (12): 69-75.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2024.12.010

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新型鹅细小病毒TaqMan探针荧光定量PCR 检测方法的建立

梁国洋1,毛明田1,郭 华1,李 芳2,张 帅1,唐 熠1*,刁有祥1*   

  1. (1.山东农业大学动物科技学院动物医学院,山东泰安 271018; 2.青岛易邦生物工程有限公司,山东青岛 266003)
  • 出版日期:2024-12-15 发布日期:2024-12-18
  • 作者简介:梁国洋(2000-),男,硕士研究生,研究方向为禽病学,E-mail:1483810383@qq.com

  • Online:2024-12-15 Published:2024-12-18

摘要: 为快速高效地检测新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus,NGPV),试验根据 NGPV VP3基因序列设计特异性引物及探针,以NGPV KC3S3株提取的DNA为模板,在构建质 粒标准品的基础上,建立TaqMan探针荧光定量PCR检测方法。结果显示:该方法的标准曲线 为 y=-3.081 6x+35.389,相关系数(R2 )为 0.998 1,质粒标准品浓度为 1.0×102 ~1.0×108 copies/μL 时具有良好的线性关系;该方法对禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)、星状病毒(Astrovirus, AstV)、小鹅瘟病毒(Goose parvovirus,GPV)、番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)、新 型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)、禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAV)等鸭常见病毒 性病原均无特异性扩增;所设计引物及探针的基因序列与GPV及MDPV的相同区域有4~11个 碱基发生突变,可以避免 GPV 及 MDPV 对检测结果的影响;该方法批内和批间检测变异系数 (CV)均小于 1.5%,对 66 份疑似感染 NGPV 鸭的肝脏样品检测阳性率为 59.1%,高于常规 PCR 检测结果(31.8%)。结果表明,研究所建立的TaqMan探针荧光定量PCR检测方法具有良好的 特异性、敏感性和重复性,可以有效区分 GPV与 MDPV,在 NGPV感染的临床诊断和早期防控 方面具有良好的应用前景。

关键词: 新型鹅细小病毒;TaqMan探针;荧光定量PCR;鸭

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