中国家禽 ›› 2024, Vol. 46 ›› Issue (11): 34-39.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2024.11.005

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检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法的建立及初步应用

万志敏1,2,3,4,龚简汐1,2,3,4,赵喆泓1,2,3,4,汤 婷1,2,3,4,李亚锋1,2,3,4,谢 泉1,2,3,4,李拓凡1,2,3,4,邵红霞1,2,3,秦爱建1,2,3,叶建强1,2,3,4*   

  1. (1.扬州大学兽医学院,禽类预防医学教育部重点实验室, 江苏省动物预防医学重点实验室,江苏扬州 225009; 2.江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州 225009; 3.扬州大学农业科技发展研究院(国际联合实验室),江苏扬州 225009; 4.教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室,江苏扬州 225009)
  • 出版日期:2024-11-15 发布日期:2024-11-15
  • 作者简介:万志敏(1986-),男,博士,助理研究员,主要从事家禽新发、再发病毒病致病机理及免疫防控研究,E-mail:wanzm@yzu.edu.cn

  • Online:2024-11-15 Published:2024-11-15

摘要: 为建立快速检测H6亚型禽流感病毒的血清学方法,试验利用前期制备的两株抗 H6亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体,建立检测 H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心 ELISA方 法,并进行特异性、灵敏度、稳定性试验以及对活禽市场采集的48份咽拭子样品的检测效果。 结果显示:该ELISA方法只与H6亚型禽流感病毒反应,而与H1、H3、H4、H5、H7、H9、H10、H12 等其他亚型禽流感病毒,血清4型禽腺病毒、血清8b型禽腺病毒、血清3型鸭腺病毒、传染性支 气管炎病毒、新城疫病毒、鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、传染性法氏囊病病毒以及禽白血病病毒 均无交叉反应;该ELSIA方法可检测2.32×104 TCID50 /mL H6亚型禽流感病毒,批间和批内重复 试验变异系数均小于10%;该ELISA方法和RT-PCR方法对活禽市场采集的48份咽拭子样品 检测结果一致,进一步检测攻毒鸡的咽拭子显示该方法可有效检测咽拭子中 H6亚型禽流感 病毒。研究表明,基于两株单克隆抗体建立的检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方 法具有特异性强、灵敏度高的特点,适用于H6亚型禽流感病毒感染的临床检测。

关键词: H6亚型禽流感病毒;单克隆抗体;血凝素蛋白;双抗体夹心ELISA

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