摘要: 为建立一种快速、灵敏的检测我国优势基因型(L型)滑液囊支原体(MS)的方法,试 验针对L型MS vlhA 基因核苷酸序列保守区设计引物及TaqMan-MGB探针,将PCR扩增的vlhA 基因克隆至pMD19-T载体,构建重组质粒vlhA-L作为阳性质粒标准品,建立实时荧光定量PCR (qPCR)方法,并检验该方法的特异性、灵敏性和重复性。结果显示:该方法特异性良好,与C型 MS-H株及其他鸡常见病原不发生交叉反应;重组质粒vlhA-L最小检出浓度为1.94×101 copies/μL; 组内和组间重复性变异系数均小于1%;临床样品检测结果与PCR测序结果吻合。研究表明,建 立的qPCR方法特异性强、灵敏性高、重复性好,适用于检测我国L型MS感染情况,还可满足监测 免疫MS-H株疫苗鸡群L型MS感染的要求。
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