摘要: 试验旨在验证番鸭就巢相关miRNA与靶基因靶向关系。试验利用miRanda、PITA和 RNAhybrid 三个软件的交集预测 miR-317和 miR-244靶基因,构建 VIPR1-pmirGLO/MAP3K7- pmirGLO 野生型和突变型双荧光素酶重组载体,将 miR-317/VIPR1-Wt 和 miR-244/MAP3K7- Wt 分别共转染至鸭胚成纤维细胞,检测双荧光素酶活性。结果显示:与miR-NC组相比,miR- 317/VIPR1-Wt共转染组相对荧光值显著降低(P<0.05);VIPR1突变后,miR-NC 组与 miR-317 组的相对荧光值不显著(P>0.05),说明突变后完全抑制 miR-317对 VIPR1的结合作用,VIPR1 与miR-317之间存在相互结合作用。与miR-NC组相比,miR-244/MAP3K7-Wt共转染组相对 荧光值无显著性差异(P>0.05);MAP3K7突变后,miR-NC 组与 miR-244组的相对荧光值差异 不显著(P>0.05),表明MAP3K7与miR-244 之间不存在相互结合作用。研究提示,miR-317与 VIPR1存在确切靶向结合位点,即 VIPR1是 miRNA miR-317的靶基因,而 miR-244与 MAP3K7 不存在靶向关系。
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