摘要： 为构建鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu virus，DTMUV）衣壳蛋白的复制缺陷型人5型 腺病毒（Ad5）为载体的重组腺病毒，研究通过一步克隆技术将DTMUV Capsid基因插入到含有 结核分枝杆菌的热休克蛋白70（mHsp70）为佐剂的pShuttle-CMV-Hsp70质粒中，构建能够表达 DTMUV Capsid和mHsp70蛋白的重组穿梭质粒pShuttle-DTMUV Capsid，并与含有pAdEasy-1腺 病毒骨架载体的大肠杆菌 BJ5183感受态细胞进行同源重组，获得重组腺病毒质粒pAd-DTMUV Capsid。载体质粒经Pac I酶切线性化后转染至HEK 293A细胞，包装重组腺病毒rAdv-DTMUV Capsid。结果显示，rAdv-DTMUV Capsid在病毒传代过程中目的基因稳定存在，且病毒滴度可 达2.3×108 PFU/mL。Western blot等结果表明rAdv-DTMUV Capsid在HEK 293A细胞中表达了 DTMUV特异性蛋白Capsid。DEF细胞感染试验证明rAdv-DTMUV Capsid可感染鸭源细胞，且 诱导IFN-α、IL-10和IL-17 mRNA表达。结果表明，研究成功制备表达DTMUV Capsid蛋白的 重组腺病毒rAdv-DTMUV Capsid，能引起细胞免疫反应，可作为一种候选疫苗。

关键词: 鸭坦布苏病毒；衣壳蛋白；重组腺病毒；Hsp70

中图分类号: 

• S855.3