摘要: 为研究胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(Insulin-like growth factor 2 mRNAbinding protein 1,IGF2BP1)基因的序列和在鸡肌肉发育中的功能,研究克隆 IGF2BP1 基因并 进行生物信息学分析,构建 IGF2BP1的过表达载体 pEGFP-IGF2BP1,在成肌细胞验证载体的 功能。结果显示:龙胜凤鸡IGF2BP1基因CDS区序列全长1 731 bp,编码576个氨基酸,与参考 序列相比,存在 6处同义突变;物种间同源性分析显示,龙胜凤鸡 IGF2BP1基因与原鸡(Gallus gallus)、火鸡(Meleagris gallopavo)、绿头鸭(Anas platyrhynchos)、猪(Sus scrofa)、奶牛(Bos taurus)、 小鼠(Mus musculus)的相似性分别为 99.7%、94.7%、92.5%、82.4%、82.8%、82.7%;蛋白质二级、 三级结构主要含有无规卷曲(45.83%)、α 螺旋(27.26%)和延伸链(20.83%);经过酶切和测序 鉴定显示,成功构建了 pEGFP-IGF2BP1 质粒,并且该质粒可在成肌细胞中表达绿色荧光, qRT-PCR 结果显示 IGF2BP1 在试验组(转染 pEGFP-IGF2BP1)的表达量极显著高于对照组 (转染pEGFP-N1)(P<0.01)。结果表明,成功克隆IGF2BP1基因,构建的IGF2BP1基因过表达 载体在成肌细胞中成功表达。
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