摘要： 为建立用于传染性法氏囊病病毒（IBDV）和禽致病性大肠杆菌混合感染快速鉴别检测的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）方法，研究分别根据IBDV VP2基因和大肠杆菌UidA基因设计合成特异性引物和探针，通过普通PCR方法扩增目的基因片段并克隆至pGM-T载体，构建重组质粒pGM-T/VP2和pGM-T/UidA作为标准品，通过正交试验确定引物和探针的最佳浓度，分别建立基于VP2和UidA基因的标准扩增曲线，并进一步验证其特异性、灵敏性、重复性，建立的方法应用于人工感染样本和临床样本的检测，并与常规PCR方法进行比较。结果显示：VP2和UidA基因的最佳上、下游引物浓度均为0.30μmol/L，VP2和UidA基因的探针浓度分别为0.35μmol/L和0.25μmol/L；VP2和UidA基因扩增的线性范围均为10³~10⁷拷贝/μL，相关系数R²≥0.99，灵敏度均为100拷贝/μL；两者组间及组内变异系数均小于2%；人工感染样品与临床样品的检测结果与普通 PCR 方法一致。研究表明，建立的二重探针 FQ-PCR 方法为同时检测IBDV和禽致病性大肠杆菌提供了快速、敏感、特异且能满足临床样本需求的检测方法。

关键词: IBDV；禽致病性大肠杆菌；混合感染；二重FQ-PCR

中图分类号: 

• S855.1

• S855.3