鸡源EphrinA2基因的克隆表达及其单克隆抗体研制

doi:10.16372/j.issn.1004-6364.2023.09.005

中国家禽 ›› 2023, Vol. 45 ›› Issue (9): 25-30.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2023.09.005

鸡源EphrinA2基因的克隆表达及其单克隆抗体研制

相汝苹^{1，2，3，4}，姚晓慧^{1，2，3，4}，谢泉^{1，2，3，4}，万志敏^{1，2，3，4}，邵红霞^{1，2，3，4}，秦爱建^{1，2，3，4}，叶建强^{1，2，3，4}，李拓凡^{1，2，3，4*}

（1.扬州大学兽医学院，禽类预防医学教育部重点实验室，江苏省动物预防医学重点实验室，江苏扬州 225009；2.江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州 225009；3.扬州大学农业科技发展研究院（国际联合实验室），江苏扬州 225009；4.教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室，江苏扬州 225009）

出版日期:2023-09-15 发布日期:2023-09-15
作者简介:相汝苹（1998-），女，硕士研究生，研究方向为家禽病毒学与免疫学，E-mail：2307430165@qq.com

Online:2023-09-15 Published:2023-09-15

摘要/Abstract

摘要： 研究旨在研制抗鸡EphrinA2蛋白的特异性单克隆抗体。试验用PCR和同源重组技术构建了鸡EphrinA2真核及原核表达载体，以纯化的EphrinA2原核表达产物免疫小鼠，将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合，用间接ELISA方法筛选出阳性细胞克隆；用SDS-PAGE、间接免疫荧光试验和Western blot验证表达产物及单抗的特性。结果显示：原核表达的重组蛋白His-EphrinA2-RBD主要位于细菌包涵体中；获得2株能稳定分泌抗EphrinA2蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为 4H6 和 1G9；单克隆抗体4H6不仅能特异性识别真核表达载体pcDNA3.1-EphrinA2在DF-1细胞中表达的EphrinA2蛋白，而且能有效识别LMH和DF-1细胞中内源性的EphrinA2蛋白。结果表明，单克隆抗体4H6与鸡EphrinA2蛋白反应性和特异性均良好，能够应用于鸡EphrinA2相关基础研究。

关键词: 鸡源EphrinA2, 蛋白表达, 单克隆抗体, 间接免疫荧光试验, Western blot

中图分类号:

S855.3

相汝苹, 姚晓慧, 谢泉, 万志敏, 邵红霞, 秦爱建, 叶建强, 李拓凡. 鸡源EphrinA2基因的克隆表达及其单克隆抗体研制[J]. 中国家禽, 2023, 45(9): 25-30.

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