摘要： 试验旨在探究以新城疫病毒为载体进行多联疫苗的构建。通过将增强型绿色荧 光蛋白（EGFP）基因和红色荧光蛋白（DsRed）基因用T2A 肽串联后克隆入嵌合新城疫病毒 AI4-2FHN的P 和M 基因之间，获得重组质粒pAI4-2FHN-GRFP。该质粒与pCI-NP、pCI-P和 pCI-L 3个辅助质粒共转染至稳定表达T7 RNA聚合酶的BSR细胞后，获得可同时表达绿色荧 光蛋白和红色荧光蛋白的重组新城疫病毒。拯救病毒在SPF鸡胚中繁殖传代，通过RT-PCR 验证，并检测重组病毒的生物学活性和外源蛋白的表达效率。结果显示：重组病毒在鸡胚内 传3代后，鸡胚尿囊液HA效价稳定在8 log2，感染细胞24 h、36 h、48 h后在荧光显微镜下观察 到EGFP与DsRed的荧光亮度逐渐增强，且相同时间内红色荧光蛋白与绿色荧光蛋白表达量 相似。重组病毒的构建为新城疫病毒作载体用于多联多价疫苗的研发提供了参考。

关键词: 重组新城疫病毒；绿色荧光蛋白；红色荧光蛋白；串联

中图分类号: 

• S855.3