传染性支气管炎病毒N蛋白广谱单克隆抗体的制备与鉴定

doi:10.16372/j.issn.1004-6364.2021.05.005

中国家禽 ›› 2021, Vol. 43 ›› Issue (5): 27-32.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2021.05.005

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传染性支气管炎病毒N蛋白广谱单克隆抗体的制备与鉴定

杜旭彬^1，2，赵佳^1，2，郭梦娇^1，2，李敏^1，2，张成成^1，2，吴艳涛^1，2，张小荣^1，2*

（1.扬州大学兽医学院，江苏扬州225009； 2.江苏高校重要动物疫病与人兽共患病协同创新中心，江苏扬州225009）

发布日期:2021-05-12
作者简介:杜旭彬（1995-），男，硕士研究生，研究方向为动物传染病防控，E-mail：dxb950227@163.com

Published:2021-05-12

摘要/Abstract

摘要： 为制备能与多种基因型传染性支气管炎病毒（IBV）反应的广谱性单克隆抗体，反应谱能够覆盖当前在国内流行的主要优势基因型毒株。通过RT-PCR克隆了QX型IBV CK/ CH/JS/2010/12株N 基因，分别插入原核表达载体pET-32a（+）和pGEX-6P-1构建了重组质粒 pET-N和pGEX-N，并在大肠杆菌中进行原核表达，通过亲和纯化获得His-N和GST-N两种重组融合蛋白。用GST-N融合蛋白免疫BALB/c小鼠，通过淋巴细胞杂交瘤技术取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合，以重组蛋白His-N作为检测抗原建立间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞。经过筛选和亚克隆，共获得12株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。 Western blot结果显示8株单克隆抗体能与测试的所有基因型IBV发生特异性反应，另外4株可以与793B型4/91株以外的其他毒株发生反应。本研究成功获得了广谱性IBV单克隆抗体，为进一步研究建立通用性IBV抗原检测方法奠定了基础。

中图分类号:

S855.3

杜旭彬，赵佳郭梦娇，李敏，张成，吴艳涛，张小荣. 传染性支气管炎病毒N蛋白广谱单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 中国家禽, 2021, 43(5): 27-32.

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