摘要： 为了建立同时区分4种不同血清型IBV的多重PCR方法，试验针对IBV H120型、 4/91型、QX型、LDT3型4种常用商用疫苗株的S1 基因序列，分别设计特异性引物，并对退火温 度、循环数和引物浓度等条件进行优化及特异性、敏感性、重复性等试验。结果表明：试验可 特异性的扩增出IBV LDT3型（860 bp）、H120型（679 bp）、4/91型（499 bp）、QX型（373 bp）毒株 的目的条带。该检测方法仅对IBV 的四种疫苗株检测为阳性，对NDV La Sota 株、ALV JS09GY3 株、ILTV Connecticut 株、MDV CVI988 株、FAdV SCneijiang 株、IBV GI-19 型、IBV GI-28型以及IBV GI-13型为阴性，对LDT3型、H120型、4/91型、QX型四种不同血清型的IBV 重组质粒的检测下限分别为1.13×105 copies/μL、7.56×104 copies/μL、4.61×106 copies/μL 和 2.94×104 copies/μL。相同条件下进行重复性试验可获得一致性的结果。应用建立的多重PCR 方法对2019年市场上收集的20种不同厂家以及不同生产批号的IB疫苗产品进行检测，产品 毒株种类标识与实际样品符合率为55%，而45%的IB疫苗毒株与实际标识不符，说明部分疫 苗中存在其他IB疫苗株的污染。研究建立的多重PCR方法可应用于市场上不同IB疫苗毒株 的鉴定以及临床疫苗样品毒株单一性检测，为IB疫苗的使用提供参考。

关键词: IBV；疫苗；多重PCR；检测方法

中图分类号: 

• S855.3