禽白血病病毒衣壳蛋白P27慢病毒载体的构建及其在鸡肝癌细胞中的表达

doi:10.16372/j.issn.1004-6364.2021.03.004

中国家禽 ›› 2021, Vol. 43 ›› Issue (3): 16-21.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2021.03.004

禽白血病病毒衣壳蛋白P27慢病毒载体的构建及其在鸡肝癌细胞中的表达

何倩^1,2，沈逵^1,2，秦爱建^1,2，3，钱琨^1,2，3,4*

（1.扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室，江苏扬州225009； 2.扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室，江苏扬州225009； 3.江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州225009； 4.扬州大学比较医学研究院，江苏扬州225009）

发布日期:2021-03-24
作者简介:何倩（1995-），女，硕士研究生，研究方向为家禽免疫抑制病，E-mail：378135339@qq.com

Published:2021-03-24

摘要/Abstract

摘要： 为构建禽白血病病毒（ALV）衣壳蛋白P27慢病毒表达载体，并检测其在鸡肝癌细胞LMH 中的表达，试验以实验室前期构建的pcDNA3.1-p27 为模板，扩增p27 基因，克隆入 pLVX-IRES-ZsGreen1载体，构建的重组质粒命名为pLVX-p27，与辅助质粒psPAX2和pMD2.G 共转染至HEK293T细胞，包装获得表达p27 基因的重组慢病毒。将慢病毒上清感染293T和 LMH细胞，检测细胞中p27 基因的转录水平和蛋白表达水平。结果显示：重组质粒pLVX-p27 构建正确，收集的慢病毒上清滴度为9×104 TU/mL；实时荧光定量PCR、Western blot和共聚焦荧光试验结果显示P27蛋白主要定位于胞浆，p27 基因的RNA和蛋白表达量在感染后96 h内随着感染时间延长逐渐升高。研究表明：表达p27 基因的慢病毒包装成功，并且能感染293T 及禽源LMH细胞，为进一步研究P27的生物学功能提供了工具。

中图分类号:

S855.3

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