摘要： 为研究CRISPR/Cas9腺病毒载体在鸡胚中进行基因敲入的可行性，将包装不同滴 度增强型绿色荧光报道基因（Enhance green fluorescent protein，EGFP）的腺病毒载体和慢病 毒载体显微注射到HH14时期鸡胚的外周血管中，对胚胎发育至3.5 d和9 d鸡胚存活、各器官 中EGFP荧光强度等指标进行检测；将包装CRISPR/Cas9系统的腺病毒载体和Donor片段的腺 病毒载体共同显微注射到鸡胚后，对成年公鸡各器官中EGFP荧光长期表达、EGFP 基因敲入 等指标进行检测。结果显示：两种病毒载体对鸡胚心脏和性腺的转染效率呈现显著的滴度依 赖性，但1×1011 TU/mL 的EGFP 腺病毒载体将9 d 鸡胚存活率从93.18%显著降低至64.11% （P<0.05）；选择滴度为1×1010 TU/mL的CRISPR/Cas9腺病毒和Donor腺病毒载体进行EGFP的基 因敲入，注射后成年公鸡多个组织均能稳定表达绿色荧光，PCR检测证明该荧光来自EGFP的 基因敲入。研究提示：腺病毒载体比慢病毒载体具有更高的鸡胚转染效率，使用CRISPR/Cas9 腺病毒载体可以在鸡胚中实现高效的EGFP 基因敲入。

关键词: 基因编辑；鸡胚；腺病毒载体；慢病毒载体；CRISPR/Cas9系统

中图分类号: 

• S831.1