新型鸭呼肠孤病毒群特异性抗原蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体的制备

doi:10.16372/j.issn.1004-6364.2020.11.006

中国家禽 ›› 2020, Vol. 42 ›› Issue (11): 33-37.doi: 10.16372/j.issn.1004-6364.2020.11.006

新型鸭呼肠孤病毒群特异性抗原蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体的制备

罗丹¹，杨伏春¹，高立¹，李凯¹，祁小乐¹，高玉龙¹，刘长军¹，张艳萍¹，崔红玉¹，潘青¹，王笑梅^1，2*

（1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/ 禽免疫抑制病创新团队，黑龙江哈尔滨150069； 2.江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心，江苏扬州225009）

发布日期:2021-01-18
作者简介:罗丹（1997-），女，硕士研究生，研究方向为禽免疫抑制病，E-mail：ldfdan@163.com

Published:2021-01-18

摘要/Abstract

摘要： 为制备新型鸭呼肠孤病毒（Novel duck reovirus，NDRV）群特异性抗原σB的多克隆抗体，研究采用RT-PCR方法扩增NDRV-SD19/6201株σB基因编码序列，将其克隆至原核表达载体pET-32a（+）中，在大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blot 鉴定结果显示，NDRV群特异性抗原σB获得高效表达，重组蛋白分子量约55 ku，该重组蛋白具有良好的免疫活性，能与His-标签抗体及NDRV阳性血清发生特异性结合反应。以纯化的重组蛋白免疫新西兰兔，获得高效价多克隆抗体，效价1∶12 800以上；间接免疫荧光试验表明，多克隆抗体能特异性识别多株NDRV毒株，具有较好的免疫反应活性。研究为建立NDRV血清学诊断方法提供了材料，同时为探究σB蛋白生物学功能奠定了基础。

中图分类号:

S855.3

罗丹，杨伏春，高立，李凯，祁小乐，高玉龙，刘长军，张艳萍，崔红玉，潘青，王笑梅. 新型鸭呼肠孤病毒群特异性抗原蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体的制备[J]. 中国家禽, 2020, 42(11): 33-37.

[1]	孙一宁，王翊珺，张蕾，郑新新，王国庆，胡娇. LncRNA 053065对高致病性H5N1亚型禽流感病毒复制能力的影响及其机制初步探索[J]. 中国家禽, 2021, 43(9): 29-36.
[2]	何书海，李军，郑高颖，董建国，杨琳，黄立. CD4+ CD25+调节性T细胞与鸡REV持续性感染的相关性研究[J]. 中国家禽, 2021, 43(9): 37-43.
[3]	刘洋，李翔，原霖，张硕，王传彬，连红岩，张良一，顾小雪. 鸭坦布苏病毒微滴式数字RT-PCR定量检测方法的建立与初步应用[J]. 中国家禽, 2021, 43(8): 25-29.
[4]	韩雯雯，蔡淼，刘秀梵，王晓泉. 血凝素蛋白稳定性对流感病毒生物学特性影响的研究进展[J]. 中国家禽, 2021, 43(8): 83-87.
[5]	史爱华，赵蕾，李林，张建伟，沈佳，习硕，姜北宇，彭湃，阮继湘，章振华. 鸡传染性支气管炎病毒M41株鸡胚增殖工艺研究[J]. 中国家禽, 2021, 43(8): 106-110.
[6]	刘潇，宋佳玲，张金城，马德青，韦平，黄腾. 马立克氏病病毒多次跨膜蛋白pUL43 多克隆抗体的制备及其体外表达分析[J]. 中国家禽, 2021, 43(7): 37-43.
[7]	徐熙皓，徐海银，赵伟，秦爱建，钱琨. Ⅱ型鸡星状病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达以及多克隆抗体的制备[J]. 中国家禽, 2021, 43(7): 44-49.
[8]	杜旭彬，赵佳郭梦娇，李敏，张成，吴艳涛，张小荣. 传染性支气管炎病毒N蛋白广谱单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 中国家禽, 2021, 43(5): 27-32.
[9]	刘鹏，汪最，毛晓惠，梁桂星，邵华斌，汪招雄，罗青平. 2株鸭源新型鹅细小病毒分离鉴定及遗传进化分析[J]. 中国家禽, 2021, 43(5): 33-40.
[10]	赵秀美，周生，姜逸，俞燕，高明燕，程旭，戴有礼. 鸡传染性支气管炎病毒Real-time PCR方法的建立及应用[J]. 中国家禽, 2021, 43(5): 112-116.
[11]	朱晓艺，翟博宇，李靖，林圣泽，曾祥伟. 绿头鸭RIG-Ⅰ基因的分子特征及其在体内的表达分布[J]. 中国家禽, 2020, 42(11): 38-44.
[12]	董婷婷，马宁宁，姜磊，张凌云，侯野，郑杰，张乾顺，肖龙，徐宏军. 鸡新城疫、禽流感（H9亚型）二联灭活疫苗悬浮培养（LaSota株+WL-s株）的免疫效力研究[J]. 中国家禽, 2020, 42(11): 118-120.
[13]	梁雄燕，余连喜，孙真真，万亮，陈雪阳，陈晶，方春，顾玉芳，杨玉莹. 鸭坦布苏病毒JZ1801株分离鉴定及其E蛋白序列分析[J]. 中国家禽, 2020, 42(10): 27-32.
[14]	李甜甜，王钜华，朱国强，钱钟，杨振，徐萍，魏荣荣，李琛，何存亚，范娟. 鹅星状病毒的分离鉴定及其致病性研究[J]. 中国家禽, 2020, 42(10): 116-120.
[15]	白晓，张诚，崔明仙，段晓军，常建光，陈立功，王学静，吕建国，刘聚祥. 肉鸡H5、H7亚型禽流感病毒母源抗体消长规律及其对禽流感疫苗接种的影响[J]. 中国家禽, 2019, 41(2): 65-66.

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