摘要: 为探究从灵山土鸡分离的携带 J 亚群禽白血病病毒(ALV)U3 区片段的 B 亚群 ALV(ALV-B)毒株GX14FF03的致病性,试验以GX14FF03毒株核酸为模板,采用PCR方法分 2段扩增病毒的cDNA,PCR扩增产物经克隆、酶切后依次连接到pBluescriptⅡ KS(+)质粒,最 终获得一个含有ALV-B完整前病毒cDNA的重组质粒pBlue-GX14FF03。重组质粒转染DF-1 细胞进行病毒拯救,拯救病毒在DF-1细胞盲传3代后收集细胞上清液保存于-80 ℃,细胞固 定后用于间接免疫荧光检测。另取保存细胞上清进行ALV p27抗原检测。间接免疫荧光检 测结果及ALV p27抗原检测结果全部为阳性。拯救病毒及亲本病毒接种DF-1细胞后进行体 外复制能力测定,结果显示拯救病毒在1、3、5、7、9 d体外复制能力与亲本病毒基本一致,差异 不显著(P>0.05)。上述结果表明病毒拯救成功,命名为rGX14FF03。
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