摘要： 试验旨在构建鸡、鸭、鹅黑素皮质素受体5（Melanocortin Receptor-5，MC5R）及其突变体的真核表达载体，并比较野生型与突变体MC5R在人源胚胎肾细胞（HEK293T）中的表达及功能的差异。从三种家禽血液中分别提取全基因组DNA，以其为模板，用聚合酶链式反应（PCR）扩增目的基因编码区。用同源重组方法将扩增的目的基因片段定向插入表达载体pcDNA3.1（+）中。单点突变构建pcDNA3.1（+）-MC5Rs突变型。用脂质体法将三种禽类野生型和突变型重组质粒pcDNA3.1（+）-MC5Rs分别瞬时转染入HEK293T细胞中，用双萤光素酶报告基因法检测胞内第二信使cAMP水平的变化来反应受体的表达和激活情况。结果表明：成功构建了鸡、鸭、鹅MC5R真核表达载体与各3个突变型（D119A、F254A和H257A）。在HEK293T细胞中表达时，与野生型相比，F254A的基础活性大幅升高，D119A与H257A的基础活性变化不大；D119A与H257A对激动剂α-MSH的反应活性完全丧失，F254A对于激动剂α-MSH的反应活性降低，为进一步研究体外鸡、鸭、鹅MC5R功能奠定基础。

关键词: 鸡；鸭；鹅；MC5R；真核表达；报告基因检测

中图分类号: 

• S852